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        液相分析常見問題⑥ 峰面積變來變?nèi)o法定量
        更新時(shí)間:2019-07-22   點(diǎn)擊次數(shù):6450次


        峰面積是定量分析的基礎(chǔ),峰面積的變化會(huì)導(dǎo)致精密度、標(biāo)曲、定量分析等一系列問題

         

        那么,如果遇到峰面積不穩(wěn)定的情況,我們要怎么辦?讓我們分三種情況分別來看一看:

         

        一、峰面積變小

         

        1. 儀器漏液

        儀器漏液會(huì)導(dǎo)致樣品損失,與正常測(cè)定結(jié)果相比,會(huì)出現(xiàn)色譜峰減小的情況。

        →這種時(shí)候,需要檢查系統(tǒng)壓力,確保所有螺絲或連接處無漏液情況,排查儀器方面的原因。

         

        2. 樣品穩(wěn)定性不好

        有些樣品自身穩(wěn)定性不好,配置后,隨著進(jìn)樣時(shí)間的推移會(huì)出現(xiàn)降解現(xiàn)象。

        →如果連續(xù)進(jìn)樣過程中,主峰的峰面積減小,同時(shí)伴隨雜質(zhì)峰面積增加的情況,建議確認(rèn)樣品在溶劑或流動(dòng)相中的穩(wěn)定性情況

         

        3. 進(jìn)樣瓶中樣品量過少

        當(dāng)樣品瓶中樣品過少可能導(dǎo)致進(jìn)樣針未吸取到足夠樣品進(jìn)樣。

        添加樣品或使用內(nèi)襯管即可解決。

         

        4. 針峰面積減小

        進(jìn)樣瓶的瓶蓋擰緊后,瓶?jī)?nèi)會(huì)出現(xiàn)負(fù)壓,可能導(dǎo)致進(jìn)樣器取樣不準(zhǔn)確。

        →第二次進(jìn)樣時(shí),由于瓶蓋已經(jīng)有孔,負(fù)壓消除后進(jìn)樣峰面積會(huì)恢復(fù)正常;也可通過使用預(yù)開口進(jìn)樣小瓶來解決該類問題。

         

        二、峰面積變大

         

        可能是由于色譜柱或流動(dòng)相條件導(dǎo)致樣品吸附,特別是一些帶電荷情況較為復(fù)雜的蛋白或多肽類樣品。

        →大濃度進(jìn)樣、平衡可能的吸附位點(diǎn)

        更換色譜柱優(yōu)化方法

        (推薦更換MG、MGII、或Proteonavi進(jìn)行嘗試)

         

        ▲CAPCELL PAK 聚合物包被結(jié)構(gòu)示意圖

         

        Proteonavi

         

        Proteonavi是采用在多孔球形硅膠填料表面鍵合丁基(C4的高性能蛋白質(zhì)•多肽分析色譜柱。該填料既具有硅膠類填料的高分離能力耐壓性,又具有耐酸性抑制蛋白質(zhì)吸附等特長(zhǎng)。

         

        ★ 具備*的耐酸性

        ★ 填料表面的蛋白吸附,即使樣品量少也能被檢出

        ★ 可對(duì)應(yīng)從分析到制備的規(guī)模擴(kuò)大化

         

        三、峰面積忽大忽小,變化無規(guī)律

         

        1. 自動(dòng)進(jìn)樣器故障或混入氣泡

        →進(jìn)樣過程中,觀察進(jìn)樣針中無氣泡混入,如果自動(dòng)進(jìn)樣器出現(xiàn)故障,需要咨詢相應(yīng)品牌儀器工程師。

         

        2. 樣品過于黏稠會(huì)導(dǎo)致進(jìn)樣不準(zhǔn)確

        稀釋樣品通常可以解決

         

        3. 進(jìn)樣瓶中混入氣泡

        →部分樣品容易混入氣泡,比如一些表面活性劑類樣品,觀察進(jìn)樣瓶中是否有小氣泡,或者對(duì)進(jìn)樣瓶進(jìn)行超聲脫氣

         

        PS: 以上對(duì)策主要針對(duì)液相分析檢測(cè)中出現(xiàn)峰面積不穩(wěn)的情況,如果在質(zhì)譜分析中出現(xiàn)峰面積不穩(wěn),則可能會(huì)有離子化、基質(zhì)效應(yīng)等其他原因。

         

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